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试管婴儿的原理和技术发展_3t9w6

2022-12-04 03:29·999 浏览

碱式滴定管排气泡的方法:将碱式滴定管管体竖直,左手拇指捏住玻璃珠,使橡胶管弯曲,管尖斜向上约45度,挤压玻璃珠处胶管,使溶液冲出,以排除气泡。第一代试管婴儿技术学名“

滴定分析又叫容量分析,是将一种已知准确浓度的标准溶液滴加到被测定物质的溶液中,直到被测定物质与所加标准溶液完全反应为止,然后根据标准溶液的所用体积和浓度计算出物质的含量。液体体积的精密测量,是滴定分析的重要操作,是获得良好分析结果的重要因素,为此,必须了解如何正确使用容量分析仪器。



滴定管是滴定时可以准确测量滴定剂消耗体积的玻璃仪器,它是一根具有精密刻度,内径均匀的细长玻璃管,可连续的根据需要放出不同体积的液体,并准确读出液体体积的量器。


根据长度和容积的不同,滴定管可分为常量滴定管、半微量滴定管和微量滴定管。

常量滴定管容积有50mL、25mL,刻度最小0.1mL,最小可读到0.01mL。半微量滴定管容量10mL,刻度最小0.05mL,最小可读到0.01mL。其结构一般与常量滴定管较为类似。微量滴定管容积有1mL、2mL、5mL、10mL,刻度最小0.01mL,最小可读到0.001mL。此外还有半微量半自动滴定管,它可以自动加液,但滴定仍需手动控制。

滴定管一般分为两种,酸式滴定管和碱式滴定管。

酸式滴定管又称具塞滴定管,它的下端有玻璃旋塞开关,用来装酸性溶液与氧化性溶液及盐类溶液,不能装碱性溶液如NaOH等。碱式滴定管又称无塞滴定管,它的下端有一根橡皮管,中间有一个玻璃珠,用来控制溶液的流速,它用来装碱性溶液与无氧化性溶液,凡可与橡皮管起作用的溶液均不可装入碱式滴定管中,如KMnO4,K2Cr2O7,碘液等。由于不怕碱的聚四氟乙烯活塞的使用,克服了普通酸式滴定管怕碱的缺点,使酸式滴定管可以做到酸碱通用,所以碱式滴定管的使用大为减少。我们的实验中就使用这种聚四氟乙烯活塞滴定管。


一、滴定管使用前的准备

试管婴儿的原理和技术发展_3t9w6

1、检查试漏

滴定管洗净后,先检查旋塞转动是否灵活,是否漏水。先关闭旋塞,将滴定管充满水,用滤纸在旋塞周围和管尖处检查。然后将旋塞旋转180度,直立两分钟,再用滤纸检查。如漏水,酸式管涂凡士林;碱式滴定管使用前应先检查橡皮管是否老化,检查玻璃珠是否大小适当,若有问题,应及时更换活塞涂凡士林。

2、滴定管的洗涤

滴定管使用前必须先洗涤,洗涤时以不损伤内壁为原则。洗涤前,关闭旋塞,倒入约10mL洗液,打开旋塞,放出少量洗液洗涤管尖,然后边转动边向管口倾斜,使洗液布满全管。最后从管口放出(也可用铬酸洗液浸洗)。然后用自来水冲净。再用蒸馏水洗三次,每次10~15mL。

碱式滴定管的洗涤方法与酸式滴定管不同,碱式滴定管可以将管尖与玻璃珠取下,放入洗液浸洗。管体倒立入洗液中,用吸耳球将洗液吸上洗涤。

3、润洗

滴定管在使用前还必须用操作溶液润洗三次,每次10~15mL。润洗液弃去。

4、装液排气泡

洗涤后再将操作溶液注入至零线以上,检查活塞周围是否有气泡。若有,开大活塞使溶液冲出,排出气泡。 滴定剂装入必须直接注入,不能使用漏斗或其他器皿辅助。

碱式滴定管排气泡的方法:将碱式滴定管管体竖直,左手拇指捏住玻璃珠,使橡胶管弯曲,管尖斜向上约45度,挤压玻璃珠处胶管,使溶液冲出,以排除气泡。

5、读初读数

放出溶液后(装满或滴定完后)需等待一至二分钟后方可读数。读数时,将滴定管从滴定管架上取下,左手捏住上部无液处,保持滴定管垂直。视线与弯月面最低点刻度水平线相切。视线若在弯月面上方,读数就会偏高;若在弯月面下方,读数就会偏低。 若为有色溶液,其弯月面不够清晰,则读取液面最高点。一般初读数为0.00或0~1mL之间的任一刻度,以减小体积误差。

有的滴定管背面有一条蓝带,称为蓝带滴定管。蓝带滴定管的读数与普通滴定管类似,当蓝带滴定管盛溶液后将有两个弯月面相交,此交点的位置即为蓝带滴定管的读数位置。


二、滴定


1、滴定操作

滴定时,应将滴定管垂直地夹在滴定管夹上,滴定台应呈白色。滴定管离锥瓶口约1cm,用左手控制旋塞,拇指在前,食指中指在后,无名指和小指弯曲在滴定管和旋塞下方之间的直角中。转动旋塞时,手指弯曲,手掌要空。右手三指拿住瓶颈,瓶底离台约2~3cm,滴定管下端深入瓶口约1cm,微动右手腕关节摇动锥形瓶,边滴边摇使滴下的溶液混合均匀。摇动的锥瓶的规范方式为:右手执锥瓶颈部,手腕用力使瓶底沿顺时针方向画圆,要求使溶液在锥瓶内均匀旋转,形成漩涡,溶液不能有跳动。管口与锥瓶应无接触。

碱式滴定管操作方法:滴定时,以左手握住滴定管,拇指在前,食指在后,用其他指头辅助固定管尖。 用拇指和食指捏住玻璃珠所在部位,向前挤压胶管,使玻璃珠偏向手心,溶液就可以从空隙中流出。

2、滴定速度

液体流速由快到慢,起初可以“连滴成线”,之后逐滴滴下,快到终点时则要半滴半滴的加入。半滴的加入方法是:小心放下半滴滴定液悬于管口,用锥瓶内壁靠下,然后用用洗瓶冲下。

3、终点操作

当锥瓶内指示剂指示终点时,立刻关闭活塞停止滴定。洗甁淋洗锥形甁内壁。取下滴定管,右手执管上部无液部分,使管垂直,目光与液面平齐,读出读数。读数时应估读一位。

滴定结束,滴定管内剩余溶液应弃去,洗净滴定管,夹在夹上备用。


三、注意事项


1、滴定时,左手不允许离开活塞,放任溶液自己流下。

2、滴定时目光应集中在锥形瓶内的颜色变化上,不要去注视刻度变化,而忽略反应的进行。

3、 一般每个样品要平行滴定三次,每次均从零线开始,每次均应及时记录在实验记录表格上,不允许记录到其他地方。

4、使用碱式滴定管注意事项

(1)用力方向要平,以避免玻璃珠上下移动。

(2)不要捏到玻璃珠下侧部分,否则有可能使空气进入管尖形成气泡。

(3)挤压胶管过程中不可过分用力,以避免溶液流出过快。

5、滴定也可在烧杯中进行,方法同上,但要用玻棒或电磁搅拌器搅拌。

自从帕特里克和罗伯特于1978年7月25日在英国奥海姆市成功操作了人类史上第一例试管婴儿,大量不孕夫妇借助试管技术获得了希望和幸福,这是人类历史上首次通过医学手段辅助的成功生殖,是人类医学史上的奇迹。

诺贝尔医学奖颁奖词

什么是试管婴儿?

试管婴儿是俗称,专业名词称为试管内受精技术或医学辅助生殖技术,该技术的一个关键特征是以适当的医学手段摄取女性卵细胞和男性精液,之后在实验室中进行组合培养,培养成为胚胎或囊胚后通过医疗手段移植回女性身体。

对于不孕不育家庭,试管婴儿技术是目前最安全有效的方法,今天全球每年有超过500万个试管婴儿出生,该技术比健康的年轻夫妇的自发受孕更有效。

随着社会的进步,科学也在不断发展,试管婴儿作为一种很安全的辅助生殖手段,解决了很多不孕不育症难题,帮助很多不孕不育患者实现了生育,拥有一个健康完整的家。

目前试管婴儿已经发展了四代,所谓的四代并不是说技术更新越往后越厉害,他们只是针对不同患者的不用技术而已,让我们来分别看看吧。

第一代试管婴儿技术

学名“体外受精-胚胎移植或常规试管婴儿”,即取出卵子和精子后,将其放入实验室的培养皿内自然受精,并培育至第3天8细胞的早期胚胎,再移植回女性子宫腔内,使其着床并发育成胎儿的过程。

适应范围:女方因素导致的不孕不育,如输卵管粘连,阻塞,子宫内膜异位,卵泡发育和排卵异常。

第二代试管婴儿技术

学名“卵细胞浆内精子注射技术”,与第一代试管婴儿技术不同的是,再完成取卵和取精后,精子进入卵子的受精过程不再依靠自己的力量,而是借助显微系统,使用超细针管吸取形态正常,活力好的精子人工方式直接注入卵细胞浆内完成体外受精。

适应范围:该技术主要适用于男性严重少,弱,畸精症及无精子症(可通过附睾或睾丸穿刺获取精子),不能自主完成受精或是想提高受精率的情况。

第三代试管婴儿技术

学名“胚胎移植前遗传学筛查/诊断(PGS/PGD)”,是在第一,二代的基础上,将早期胚胎继续培育第5天形成由100多个细胞组成且内外细胞分化明显的囊胚,再取其外围细胞(以后发育成胎盘的部分,不会伤害胎儿主体)的遗传物质进行PGS/PGD基因检测,判断胚胎是否存在染色体异常,是否受遗传性疾病的影响,从而筛选出健康的囊胚进行移植。

适应范围:患有染色体疾病,遗传性疾病以及大龄,多次IVF失败,复发性流产,多次胎停或者已生育过缺陷的家庭,以及追求优生优育和高成功率的家庭。

第四代试管婴儿技术

学名“卵胞浆置换技术”,是以老化卵子的基因加上年轻卵子的细胞质来合成新的卵子,卵胞浆置换也俗称第四代试管婴儿胚胞转移技术,是胞浆置换领域的最新尝试,以老化卵子的基因加上年轻卵子的细胞质来合成新的卵子。卵胞浆置换也俗称第四代试管婴儿(或称三人试管婴儿),细胞质置换技术,能更好的应对老化卵子问题,提高大龄女性的妊娠可能性。其胞浆里的遗传基因不到1%,主要携带基因的还是卵子的细胞核将高龄患者的卵细胞核取出,放置在年轻卵子的卵细胞质中进行培养,大幅度改善卵子质量和解决卵子老化问题,极大地提高高龄患者的试管婴儿成功率。

适应范围:对于35岁以上卵子质量较差、同时想要将自己的卵子用于试管婴儿流程的患者来说,这是一个很好的解决方案。

试管婴儿流程图解

试管婴儿流程图(安心欧孕绘制)

上图中所有流程即为第一代试管技术;

实验室受精和培养的人工干预优选即为第二代试管技术;

胚胎/囊胚移植前进行的基因筛查和诊断即为第三代试管技术;

第四代技术见下图:

第四代试管婴儿图解(安心欧孕绘制)

实验室延时监控技术

延时监控技术用于定期检查胚胎的发育,然后由计算机分析该信息并计算结果。在该技术出现以前,实验室培养师需要每天将胚胎从培养箱中取出一次,并由临床医生进行分析,延时监控技术和计算机模拟建模计算可以使胚胎留在培养箱中,并使临床医生清晰的对胚胎的状态做出判断。

延时监控技术可以每20分钟、10分钟或5分钟进行一次拍摄和计算,具体取决于诊所使用的设备和实际操作,间隔时间越短,可用于分析的信息越详细,最终计算机会使用建模的算法来分析胚胎的发育,并确定哪些胚胎更有可能成功发育成婴儿。

延时监控技术还可以使人们更加精确地了解胚胎的基因学形态,研究发现具有染色体异常的胚胎需要超过100个小时才能进入胚泡期,使用这项新技术可以识别出有染色体异常风险的胚胎。

胚胎发育的时机至关重要,计算机能够识别哪些胚胎延迟了发育,这些胚胎尽管表面看上去与正常的相似,但实际上成功的机会减少了。

延时监控技术使科学家对胚胎健康有了一些新的了解,过去尽管所有胚胎看起来都同样健康,但从统计学上讲,只有25%的胚胎具有发育为婴儿的潜力,通过新技术,科学家将能够确定哪些胚胎是25%其中的,并选择它们进行植入。

因为该技术刚刚出现,尚未完全发挥作用,但毫无疑问的是使用延时监控技术会显著提高试管婴儿成功率,随着越来越多的诊所和越来越多的夫妻选择使用这种方法,科学家将对如何选择最有潜力的胚胎有更好的了解。

其他试管婴儿相关技术

细胞体外成熟培养IVM技术,专门针对一些卵子成熟障碍的不孕患者,特别是那些患有多囊卵巢综合症、卵泡发育迟缓的患者,该技术将未成熟的卵母细胞取出,在体外进行培养、受精,然后将胚胎移植到母亲子宫腔内生长。

通过高倍放大形态学检查选择精液MICS技术,该技术用于对男性精子的选择,可以提高成功率和婴儿健康率。

精子卵浆内注射及孵化PICS技术,该技术针对碎片率偏高的弱精少精、DNA碎片率偏高的男性不孕问题,可以有效降低12%的流产率,从而提高最终受孕结果。

睾丸穿刺精子抽提TESE技术,对于非阻塞性无精子症的病人或者从附睾中未能抽取到精子的病人抽提精子。

试管婴儿是一个复杂的医学流程,其中还有大量的技术应用,最终的目地都是为了提高成功率并减少并发伤害。

所有上述治疗方法的体外受精程序类似,关键的区别在于实验室的培养。 关于方法的选择和决定,应根据每个人的实际情况,由经验丰富的医生和胚胎学家单独制订方案,以选择最有可能获得成功的技术。

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